
该研究探讨了建立多年生病毒诱导基因沉默(VIGS)系统的方法。
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简介:
近年来发展起来的病毒诱导基因沉默(VIGS)技术,是一种利用反向遗传学迅速鉴定植物基因功能的创新方法。 这种技术是转录后基因沉默机制的直接体现。 相比于传统的转基因技术,VIGS是一种即时表达系统,能够迅速获得令人满意的结果。 目前,该技术已被广泛应用于探究植物基因的功能研究,然而,大多数研究都集中在模型植物上,并且实验通常在室内环境下,并受到光照和温度等因素的影响。 为了克服这些局限性,本研究提出了一种全新的策略,即利用多年生罗莎植物作为实验材料,在野外条件下建立VIGS系统。 我们以RrGT1基因为报告基因,并采用修饰的TRV-GFP病毒作为载体,成功构建了重组病毒载体。随后,我们以多年生的 *R. rugosa* “Zizhi” 和 *R. davurica* 为实验对象进行验证。 考虑到蔷薇植物的生长习性和田间的自然环境条件以及VIGS的最佳实施时机,我们仔细分析并确定了最佳的接种时期、感染液的配制以及病毒接种技术等关键问题。 同时,我们也对载体和接种后培养的植物材料的光照和温度条件进行了全面考察与优化,力求找到最适宜的生长环境。 当RrGT1基因被沉默时,罗莎植物表现出淡花瓣的独特表型特征。 通过一系列检测手段证实了内源性RrGT1基因表达水平显著降低的同时,所有花色苷含量也得到了明显的抑制。 由此表明,在田间条件下利用多年生罗莎植物建立VIGS系统这一尝试取得了显著成功。
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