蛋白质分子质量测定中凝胶层析法的应用-实验报告-WORD文档

简介：
本实验报告详细探讨了凝胶层析技术在蛋白质分子质量测定中的应用方法与原理，并分析具体实验数据和结果。 这篇实验报告主要介绍了利用凝胶层析法测定蛋白质分子质量的实验过程及其结果分析，包括实验目的、原理、操作步骤、数据处理以及讨论部分。 该实验基于凝胶多孔结构对不同大小蛋白质分子排阻效应的特性来实现蛋白质的有效分离。具体而言，大尺寸的蛋白质无法进入凝胶内部空隙而被排除在外，小尺寸的蛋白则可以自由扩散进入这些微小空间内。通过测量各种标准和未知样品在柱中的洗脱体积（Ve）及有效分配系数（Kav），我们可以计算出它们各自的分子量。 实验操作流程涵盖了对凝胶进行溶胀处理、装填到层析柱上，测定整个系统的总体积(Vt)与外部空隙容积(V0)，并记录未知蛋白质的洗脱位置。此外，还通过紫外分光光度计测量样品在280纳米波长下的吸光值，并绘制出相应的洗脱曲线来确定Kav。 数据处理环节中包括了测定Vt、V0及Ve的具体数值以及标准蛋白的相应参数。利用制作的标准曲线（即Kav-lgMr和Ve-lgMr），可以推算出未知蛋白质的确切分子量。 在实验讨论部分，作者分析了自动收集器每管所采集液体体积对最终结果的影响，并探讨了添加样品后加入洗脱剂可能带来的误差问题，同时提出了一些改进方案。